精子优选处理是辅助生殖技术中的重要环节,通过一系列的实验室操作和筛选方法,选择质量优良的精子,以提高试管婴儿等辅助生殖技术的成功率。本文将深入探讨精子优选处理的方法,包括密度梯度离心法、免疫法、活精载体法等,以及这些方法的基本原理、优缺点和适用范围,为备孕夫妻提供更全面的了解和选择。
为什么要进行精液洗涤?
精子在附睾中获得受精的能力,但是附睾分泌一种物质掩盖在精子表面,使精子处于半休息的状态。此外,这些物质还挡住了精子表面与卵子识别的位点,这些位点就像是打开卵子的钥匙。这些抑制性的物质一方面使精子减少了不必要的能量消耗,另一方面起到保护好钥匙的作用,为与卵子结合做准备。在自然受孕的时候,在女性生殖管道中这些抑制因子会在各种酶的作用下去除,使精子加能,并暴露出精子表面开锁的钥匙。这个过程专业上称为精子获能。然后,精子先生们需要经过长途跋涉,才能取得比赛的胜利——遇到卵子。因此,无论是人工授精还是体外受精,我们都需要去除精浆中的抑制因子。此外,在处理精子的培养液中含有激活精子的物质,有利于精子处于一个完全激活的最优状态。
精液样本的优化处理主要通过精子洗涤完成,俗称“洗精子”、“精子提炼”。其目的是将精子和其他物质分离开来,如白细胞,病毒,细菌等,尽可能回收活力充沛的精子,从而提升精液质量,提高成功率。
精液优化处理方法
目前精液优化处理方法有密度梯度离心法、上游法、梯度离心联合上游法、直接洗涤法等,每种方法均有优缺点,选用时需根据精液标本的质量综合考虑,主要采用密度梯度离心法和上游法。
1.密度梯度离心法
密度梯度离心法是一种分离不同沉降系数颗粒的方法。它利用不与所分离颗粒起作用的介质配制成不连续的密度梯度,在离心管中自下而上由浓到稀地依次叠加,需分离的颗粒经离心后,不同密度的颗粒各自停留在相应的密度层中,从而达到分离的目的。由于成熟且形态正常的精子、未成熟或畸形的精子、死精子、白细胞及细菌等物质的沉降系数不同,在一定的离心力的作用下,每种细胞在离心后就会停留在不同的梯度层中,成熟且形态正常的精子沉淀在试管底部,从而达到"提炼"优质精子的目的。
梯度离心法主要步骤
1.精液收集禁欲3-7天,为防止样本受污染,由护士告知病人先排尿并洗净双手,在相对无菌条件下,采用无菌洁净的专用取精杯,手淫法取精,取出后经传递窗立即送入精液处理室。核对夫妻双方身份证、结婚证及专用取精杯上的姓名,吸取少量精液滴在精液标本卡上,并及时装入精液标本卡专用袋。
2、室温孵育半小时,充分液化。
3、取15ml尖底离心管,写上患者夫妇姓名、日期和病历号,将患者标本装入管内,显微镜初步镜检(精液浓度、活动率、前向运动精子百分率等)。
4、密度梯度离心法:按1:1的比例向离心管加入非连续梯度离心液,从下到上缓慢加入,注意各层液面须保持清晰的界面。
5、将混匀好的精液缓缓加入离心管梯度液面上层,300g离心15min。
6、离心好后,取出,弃上清,吸取沉淀,加入到3ml培养液(G-IVF)中混匀,300g离心5min。
7、离心好后,弃上清,将沉淀调整为0.5ml。吸取处理好的精子悬液,评估精子浓度,活力等。
精液的优化处理取决于男性本身的精子质量,实验室操作人员无法改变精子的本身,只能按照小蝌蚪具体来源和质量,采取不同的的处理方法去优选,经过实验室人员一步步精细操作和严格把关,最终挑选出活力四射的“精”兵,从而提高卵子的受精率。