精子冷冻是人类生殖细胞冷冻中较成熟的技术少量精子冻存(稀少精子冷冻)是该技术的补充与完善,与第二代试管婴儿(ICSI)的结合很大程度上提高了稀少精子患者的受孕率,带来了生子希望。ICSI 的成功率很大程度上受精子质量和显微操作技术的影响,对于重度少弱精患者,少量精子冷冻技术减少了患者因精少而多次取精带来的痛苦,特别是女方因为卵巢功能减退获卵数减少的夫妇,提高了此类患者进行辅助生育治疗的灵活性。
少量精子冻存的方法
临床上少精子症患者可以通过射精获得微量精子,而无精子症患者主要通过睾丸精子抽吸术( TESA) 、睾丸显微取精术(MESE)、经皮附睾抽吸术( PESA)和显微附睾精子抽提术( MESA) 等外科取精术获得少量的睾丸或附睾精子,这些精子数量有限而且来之不易,如果将这些患者的受精当日剩余,或取出的微量精子冷冻保存,避免取卵周期因为精子不够而造成卵子浪费,为取卵当日成功授精提供了一定的保障,减少再次穿刺给患者带来的躯体、精神的痛苦和经济上的负担。
传统的精子冷冻方法不适用于对穿刺获得的稀少精子进行冷冻保存,主要原因在于冷冻/复苏过程需要对精子作2~3次离心洗涤,每一步操作都会造成精子不同程度的损失。因此,为缓解稀少精子患者群体的不育问题,需要人们不断探索新的针对少量精子冻存(稀少精子冷冻)的冷冻方案。目前常用的少量精子冻存(稀少精子冷冻)方法包括麦管法、冻存管法等:
麦管法
使用拉细的无菌玻璃吸管吸取10ul精子与保护剂的混合液,小心插入麦管端部轻轻吹出所有液体,管中将会形成一段液柱,插入配套的彩色管帽,在液氮平面上方3cm左右水平降温5min后投入液氮。
冻存管法
使用2ml细胞冻存管。使用枪头混匀混合液标本,吸取10ul点至冻存管底部边缘,形成一个小滴。拧紧冻存管帽后垂直于液氮平面,在蒸汽中熏蒸5min后,标签朝外卡在冷冻支架最下方,投人液氮。
稀少精子冷冻的适应症
少量精子冻存(稀少精子冷冻)适用于:
1、 无精子症患者通过睾丸精子抽吸术( TESA) 、睾丸显微取精术(MESE)、经皮附睾抽吸术( PESA)和显微附睾精子抽提术( MESA)等外科取精术获得的少量睾丸或附睾精子;
2、不射精症患者,接受电刺激取精获得的微量精子;
3、精液中精子密度<1×106/ml的严重少精子症患者进行精子积攒。